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為了使石蠟?zāi)軌蚪氲浇M織塊內(nèi),必須經(jīng)過一種既能與脫水劑混合,又能與石蠟相溶的媒介物質(zhì),這個過程稱透明。目前最好的透明劑是二甲苯。很多人認(rèn)為二甲苯極容易使組織發(fā)脆,這個觀點并不正確,在固定充分、脫水徹底的情況下,二甲苯并不會引起組織發(fā)脆,相反會使某些組織結(jié)構(gòu)比較質(zhì)韌的組織(比如子宮肌瘤等)由于透明充分而變的更好切。而所謂的發(fā)脆,往往是組織浸蠟充分,使組織恢復(fù)到其原有的質(zhì)地,在蠟塊冰凍的情況下產(chǎn)生的,如果用冰水或常溫切片,就不會有脆的現(xiàn)象。所以二甲苯透明(2道)各30-60分鐘,如果有時間,時間可以更長,透明充分,蠟也能浸的更充分,那怕就是透明過夜,甚至60度過夜也沒有問題。但如果組織內(nèi)有極少量水份且組織較小或較薄時,二甲苯在高溫下將水“析”出或水份揮發(fā),在此過程中可能會導(dǎo)致組織干烤,從而導(dǎo)致組織發(fā)硬(具體原因不明)。
組織透明后,在熔化的石蠟內(nèi)浸漬的過程稱為浸蠟。目的為了使石蠟滲透到組織中去。浸蠟溫度過高(超過60℃),如果小組織內(nèi)含有少量水份,會導(dǎo)致小組織發(fā)硬,還會使組織內(nèi)的抗原受到破壞;所以浸蠟用的石蠟熔點應(yīng)該在54-56℃左右(三道),時間:第一道:石蠟30分鐘;第二道:石蠟60分鐘;第三道:石蠟,90分鐘以上。浸蠟溫度控制在56~58℃左右。(第一道也可用硬脂酸石蠟1:3混合浸蠟,不僅可軟化組織,特別適用于比較韌、硬的組織,而且由于硬脂酸是弱酸性的,染色后核漿比比較鮮明,缺點是容易脫片,疏松組織在展片時容易散開,所以要用后面幾道石蠟盡可能將硬脂酸洗凈。所以一般不要使用此法)。用開放式的脫水機最好每天打開第一道石蠟的蓋子,讓二甲苯揮發(fā)掉。浸蠟用的石蠟如有雜質(zhì)應(yīng)該過濾,以防吸入組織內(nèi),造成切片刀刀口受損,或切片破碎和劃痕增多。
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